药物代谢物定量方法（一）

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生物样品中代谢物的测定方法有很多种，一般可分为直接定量法、代谢产物水解后通过母体药物间接定量法或利用药物与其代谢物之间的响应因子定量法。

直接定量法

直接定量法是测定生物样品中代谢物的最合适方法，但需要考虑以下两点：

1.一般情况下，代谢物比母体药物更具亲水性，尤其是葡萄糖醛酸。这使得直接测定代谢物的难度加大，因为大多数情况下，这些极性分析物和干扰基质成分之间是无法实现色谱分离的。然而，液相色谱串联质谱仪的出现克服了这一问题，它可以实现代谢物的直接定量。由于LC-MS/MS具有快速、特异性强、灵敏度高等特点，在药代动力学和代谢研究中发挥着重要作用。

2.生物样品中代谢物定量的可靠性和准确性需要合适的对照标准物质。在分析方法的验证中，使用合适的对照标准物质在给定的生物样品中制备校准和对照样品。一些代谢物标准品通常在市场上无法买到，尤其是新药或滥用药物的情况。此外，现有的代谢物标准品可能非常昂贵，因此并非每个研究小组都能获得，尤其是学术领域。在使用LC-MS/MS分析时，推荐使用稳定同位素标记的代谢物标准品，但其可能比未标记的代谢物更贵。

药物代谢物定量方法（图片来源：迪信泰检测平台）

这时候，有人可能会问：为什么不根据母体药物的标准曲线来定量代谢物的浓度？因为这个标准曲线是随时可以获得的。在不同的液相色谱检测系统中，代谢产物结构的改变会对检测结果产生不同程度的影响。即使结构变化很小，采用大气压电离源进行质谱分析也很容易出现这一问题。有报道称，两种化学式相同的氧化异构体代谢物在ESI-MS中的响应因因子不同，或在ESI的正离子模式中未检测到与母体药物不同信号，只有在负离子模式下才检测到这些化合物。有时代谢物与母体药物具有相同的发色团，则一般不使用紫外检测。但这项技术在药代动力学研究中的主要局限性在于灵敏度和选择性太低，因为某些代谢物在波长处没有紫外吸收，无法将其与背景区分开来。如果使用电化学检测，其响应也可能对代谢物的结构有很大的依赖性，尤其是对于I相代谢物，与母体药物相比，通常其氧化还原性发生了变化。此外，这两类属于选择型检测器，适用性有限.

在没有合适标准的情况下，也可以进行直接定量。为此，检测器需要给出所有目标化合物的摩尔响应值。此外，该检测器应具有灵敏度高、动态范围宽、坚固耐用和易与操作、与反相色谱梯度洗脱兼容、不易受基质干扰等特性。虽然可以使用更高级的检测器，但其中很少有可用于代谢物定量的。最近，FDA出台了关于代谢物安全性测试的指南，该指南建议所有大于母体药物10%的代谢物都应进行检测，大家感兴趣的话，可以去找来看看。

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参考资料：Roskar, Robert , and T. Trdan . Analytical Methods for Quantification of Drug Metabolites in Biological Samples. Chromatography - The Most Versatile Method of Chemical Analysis. 2012.