药物代谢物定量方法（二）

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上期我们介绍了药物代谢物定量常用的方法——直接定量法。该法需要注意的两点：第一个是一些代谢物比母体药物更具亲水性，尤其是葡萄糖醛酸，这加大了代谢物直接定量的难度，随着液相色谱串联质谱仪的出现，我们克服了这一问题，因此LC-MS/MS常用于在药代动力学和代谢研究。第二个是需要合适的对照标准物质来保证代谢物结果的可靠性和准确性，但代谢物标准品有的无法买到或价格比较贵。后来各类检测器的出现，解决了标准品的问题。其实药物代谢物定量除了用直接定量法外，还可以利用药物与其代谢物之间的响应因子进行定量。那么接下来，小编就带大家一起看看响应因子是如何进行定量的。

药物代谢物定量方法（图片来源：迪信泰检测平台）

响应因子定量法
使用响应因子定量法的前提是药物和所有代谢物都可以实现色谱分离。响应因子定量是基于LC-MS/MS与检测器相结合，该检测器提供每个化合物的摩尔响应值，通常用RAD检测器。代谢物和母体药物在RAD上的响应值与在LC-MS/MS的响应值比有关联。样品中的低水平的代谢物和母体药物通过灵敏度高的LC-MS/MS进行测量，利用RAD检测响应因子，从而可以计算代谢物浓度。最佳分析方法是在液相色谱分离后结合RAD和MS，以便在两个检测器上以相同的保留时间获得代谢物和母体药物的峰。由于RAD的动态范围较大，因此非常适合于此类代谢物分析，但它的使用受到放射性标记标准物质的可用性的限制。

LC-MS/MS最常用的检测器是紫外检测器，在代谢物和母体药物发色团具有足够的选择性，不受代谢的影响，代谢物与其他药物相关物质和内源性化合物可以很好的分离的情况下，代谢物可使用紫外检测器进行（半）定量分析。

这种方法在一定的标准下对代谢物定量也可能是合理的。在确定响应因子后，根据母体药物的标准曲线对代谢物进行定量。响应系数必须保持恒定，因此需要定期对响应系数进行验证。使用相同且无故障的仪器，反应因子在长时间内还是非常稳定的。

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参考资料：Roskar, Robert , and T. Trdan . Analytical Methods for Quantification of Drug Metabolites in Biological Samples. Chromatography - The Most Versatile Method of Chemical Analysis. 2012.